PH0319 | SDS裂解液 SDS Lysis Buffer

SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等。

SDS裂解液的主要成分为50mM Tris(pH8.1)，1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

保存条件： 常温运输，2-8℃保存！有效期2年。-20℃可长期保存。PMSF收到后没有及时使用放置-20℃保存。

试剂组分 

SDS Lysis Buffer----100mL

PMSF(100mM)----1.5mL【赠送】

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

对于培养细胞样品：

1. 融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

3. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200微升裂解液。

对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

3. 按照每20毫克组织加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。