PH0989 | Regaud氏液 固定液 Regaud Fixative Solution

(一）固定的作用
(1)实验动物或临床活检组织取材后，应该及时将取下来的新鲜组织迅速投入到固定液内，借助化学药物的作用使组织细胞内的蛋白质、脂肪、糖原和酶等各种有机成分沉淀凝固下来，同时使组织细胞的形态结构保存下来，使其与原来活体时结构相似。
(2)保证固定组织的新鲜度，防止组织细胞自溶和腐败。放置过久或操作手法不熟练就会造成组织细胞收缩变形或发生自溶改变，一般以脑、脊髓、骨髓、胰腺和胃肠道黏膜等组织自溶速度较快。
(3)因沉淀凝固的关系使组织细胞内的成分产生不同的折光率，而使活体状态下看不清的结构变得清晰可见。
(4)使得组织细胞容易被化学染料着色。
(5)使组织变硬，增加了组织的硬度，便于切割成需要的形状。

(二）固定的注意事项
(1)取材和固定密不可分，离体组织尽量迅速放入固定液中。
(2)固定液容器要略大于放入的组织，以便拿取自如。
(3)固定液的量要大于组织的十倍体积，特殊贵重的固定液不少于组织的4倍。
(4)尽量常温固定，如要观察组织中的糖原亦80%乙醇冷藏固定组织为好。

（三）显微镜标本制作组织固定后的处理
随着医学的进步和石蜡切片机的更新换代，石蜡制片已使用了一次性塑料组织包埋盒，材质：POM聚甲醛塑料，内径尺寸：3.1cm×2.65cm×0.5cm,固定好后的组织标本修块成略小于包埋盒内径尺寸即可，一般为1cm×1cmx0.2cm常规的组织块用于石蜡制片，如组织标本可用于教学或其他利用价值可修块成2cm×2cm×0.4cm的组织块制成石蜡块保存。组织标本固定到适宜程度后，需要进行适当的处理，例如充分洗涤，以利于组织标本的制作和保存，通常按所用固定液的性质，采取流水冲洗、自来水浸泡或直接用相应浓度的乙醇脱水，简介几种处理方法如下。

(1)含有GE酸、C铬酸钾及E酸等强氧化剂固定液的组织，必须将这些强氧化剂彻底清除，才有利于染色和长期保存，一般至少需经流水冲洗6h,或多次更换10倍体积的自来水浸泡至少6h,已达到充分水洗的目的，在切片前处理掉组织细胞内的金属沉淀物质能延长切片刀片的使用寿命。
(2)用冰醋酸固定的组织标本，如经自来水洗可引起组织不必要的膨胀，故不必自来水洗。
(3)用KW酸固定的组织标本，也无需经自来水洗。
(4)用S汞固定的组织标本，会在组织细胞内形成不溶性的沉淀成分，在接下来的切片过程中会损伤刀片，固定后制片前进行脱汞处理是必要的，方法是在充分自来水洗后用70%乙醇加少量单质碘，待碘全部溶解乙醇液体呈红葡萄酒色为度，大概每100mL加碘10g,浸泡6h左右即可消除，再用70%乙醇去除碘，如组织上尚存的黄色可再用5%的硫代硫酸钠水溶液去除，注意此切片在行苏木精染色前可镜下观察切片组织上有无汞盐沉淀，如有沉淀可行乙醇碘液再次脱汞，时间3~5min既可去除汞盐沉淀，可镜下观察直至无沉淀为止。
(5)甲醛固定的组织标本，如长期浸泡在固定液中也需自来水充分冲洗，否则影响细胞核的着色，也影响苯胺类染料的着色，有时不但需自来水彻底冲洗还需要用1%的碳酸锂水溶液等弱碱性水溶液处理后才有利于常规HE染色及其他特殊染色。
(6)对组织标本暂存备用不制成组织标本，一般多置于60%~80%乙醇中保存，若对有价值的组织标本需要长时间保存，可置于丙三醇乙醇混合液中效果较理想。

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试剂组分

试剂(A): Regaud 溶液 250ml
试剂(B): 福尔马林溶液 250ml

按实验具体要求操作，临用前按试剂(A)：试剂(B)=1：1 充分混合，即配即用。 

临用前混合使用，一般1cm×1cm×0.2cm常规的组织块固定6h。

注意事项：
1、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透；

2、常规活检组织比较适合的厚度为 2～4mm，一般不超过 6mm。

3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于 10：1。
4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。
5、 取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

6、含有氧化剂固定液的组织，需要将氧化剂清除，才有利于染色和长期保存，一般流水冲洗6h，或多次更换10倍体积的自来水浸泡6h，来达到充分水洗的目的。